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专利摘要: 本发明公开了一种青霉基因工程菌的制备方法及青霉基因工程菌的应用,所述方法为:获得潮霉素抗性表达盒并克隆到目标质粒上,获得潮霉素抗性的重组质粒;分别克隆青霉脂肪酶基因PEL、扩展青霉甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子PgpdP和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子TtrpC,得到有强启动子驱动的PEL基因表达盒;将PEL基因表达盒克隆到潮霉素抗性的重组质粒中,获得含潮霉素筛选标记PEL基因超表达载体;将该超表达载体转化工程农杆菌,利用农杆菌介导转化法将PEL基因表达盒转化到青霉菌株中,得到青霉基因工程菌。本发明获得的青霉工程菌产脂肪酶能力强,青霉工程菌制备的脂肪酶酶活比出发菌青霉野生菌提高了100%~150%。 -
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利用基因工程提高玉米直链淀粉含量的双元载体构建方法
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专利摘要: 本发明公开了一种利用基因工程提高玉米直链淀粉含量的双元载体构建方法,设计引物扩增扩增第九外显子及内含子部分序列(315bp)和第九外显子反义序列(155bp),同时扩增sbe2b启动子,将含有正反外显子及内含子的整体DNA片段连同启动子同时连入pCAMBIA3301载体的多克隆位点中;然后,将ss1启动子片段及ss1基因cDNA片段替换MCS中含sbe2b?RNAi三片段的pCAMBIA3301载体的35S及GUS片段,因此该表达载体同时含有sbe2b启动子控制的反义sbe2b?cDNA片段和ss1启动子控制的ss1全长cDNA片段。本发明提供的表达载体中含有的sbe2b?RNAi片段能够降低SBEIIb酶的活性,使淀粉合成时分支数降低,从而提高直链淀粉的相对含量;同时该载体中含有的ss1基因过表达片段能够提高玉米胚乳SSI酶的活性,从而提高总淀粉含量。
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